MUESTRAS VETERINARIAS

EXTRACCIÓN DE ORINA Y LÍQUIDOS DE PUNCIÓN

1.a. Orina
En la medida que sea posible remitir la primer orina de la mañana ya que es más concentrada Deberá enviarse en un frasco de urocultivo o en una Jeringa de 5 o 10ml. Las orinas siempre deben conservarse en heladera hasta su envío al laboratorio

1.b. Líquidos de Punción (Pleural, Ascitis, LCR, Articular)
Lo ideal es enviar una muestra para Citoquímico, en jeringa estéril y otra para cultivo bacteriológico, en tubo estéril que puede solicitarlo al laboratorio o como alternativa puede usarse un tubo de hisopo (sin gel). También puede enviarse otra muestra del líquido en un tubo de tapa verde o violeta con EDTA (de hemograma), para el recuento de células nucleadas. Cantidad de muestra requerida: 5 a 10 ml.

EXTRACCIONES SEROLÓGICAS

2.a. Extracción de Sangre

Recomendamos los siguientes pasos:
a) la extracción debe realizarse con agujas cortas, estéril, y de grueso calibre, para evitar la hemólisis. La jeringa debe estar seca y sin residuos de ácidos o álcalis;
b) trasvasar la sangre hasta la mitad del tubo o frasco, limpio y seco. Muestras muy escasas en recipientes muy grandes permiten que haya un mayor movimiento de la sangre dentro del recipiente, si la misma es trasladada, esto puede originar hemólisis;
c) descargar la sangre suavemente, apoyando la aguja de la jeringa sobre la pared interna del tubo;
d) colocar el tubo en pico de flauta (inclinado a 45º con tapón hacia arriba) a temperatura ambiente;
e) después de terminar con la extracción a todos los animales, recién empezar a parar los tubos de la primera extracción a la última;
f) dejar pasar 4 a 5 horas antes de llevar a frío;
g) por último, cabe destacar que la remisión de las muestras debe acompañarse de un rótulo en donde se aclare fecha, hora de extracción, numero y estado del animal, la forma de conservación de la muestra, y todos los datos del establecimiento, tales como:

-Numero de DI.CO.SE. Físico;
-Razón Social del Numero de DI.CO.SE. Físico;
-Fecha de extracción de la muestra;
-Especie animal;
-Cantidad de muestras extraídas;
-Numero de DI.CO.SE. del propietario del ganado (registro en MGAP);
-Veterinario responsable de la extracción;
-Numero del Veterinario responsable;
-Motivo de estudio de las muestras;
-Numero de sangrado;
-Operador (nombre y apellido);
-Supervisor (nombre y apellido);
-Enfermedad a estudiar.

La toma y remisión de muestras constituye un procedimiento técnico de vital importancia en el laboratorio de cualquier especialidad. Pero en el diagnostico clínico inmunológico adquiere características muy singulares pues el manipuleo de material biológico deberá cumplir ciertos requisitos para su preservación e integridad de tal forma que "in vitro" guarde y cumpla la misma función que "in vivo".

2.b. Extracción para Análisis Clínicos

"Un buen diagnóstico será tan bueno como buena sea la muestra"

Importante:
A todo paciente que se le vaya a realizar un estudio sanguíneo debe hacer AYUNAS.
En general se recomienda 6 a 8hs,y en el caso de Colesterol y Triglicéridos 10hs.
Remita la muestra con la Orden y Datos

Nombre del animal, especie, raza, edad y sexo
Apellido del propietario
Identifique la muestra.

Tubos con anticoagulantes. (hemograma, coagulación,VES y glicemia):
Los tubos están identificados según tipo de anticoagulante y/o análisis a realizar.
Una vez descargada la sangre homogeneizar la misma con el anticoagulante mediante 4 o 5 movimientos de inversión, suaves.
NO se aceptan muestras de sangre en jeringa, solicite tubos al laboratorio y se lo llevaremos a la brevedad posible.

Hemograma
Se usan los tubos de tapa VIOLETA o VERDE (0.5, 1 o 2.5 ml) que contienen EDTA como anticoagulante.
La sangre va hasta el enrase. Si no tiene tubos para hemogramas solicítelo al laboratorio, pero no envíe sangre con heparina ya que produce deformación celular y aglutinación plaquetaria.

Velocidad de Eritrosedimentación
Usar los mismos tubos identificados para la coagulación..
La VES es una reacción no especifica, que indica algunas patologías ocultas como: Infecciones, alteraciones cutáneas, hormonales y tumores.

Coagulación (Crasis Sanguínea)
La muestra se remite en los tubitos identificados para dichos estudios y que contiene CITRATO DE SODIO como anticoagulante.

Glicemia
Debe usar el tubo identificado para dicho estudio cuyo anticoagulante es EDTA –FLUORURO.

Tubos sin anticoagulante (Tubos Secos)
La mayoría de las muestras se procesan en éste tubo: Bioquímica, Serología, Endocrinología. NO AGITARLOS

Otros puntos a considerar
- En el caso de que el animal tenga una vía con suero no se deberá extraer sangre de la misma ,ya que se alterarían los resultados, se debe puncionar el miembro opuesto.
- Nunca descargue la sangre con aguja, porque va a hemolizar la muestra.
- Tampoco realice la descarga en el tubo en forma brusca porque provocará el mismo efecto,
- La sangre se coloca por las paredes del tubo.
- Siempre se debe colocar la sangre primero en los tubos con anticoagulante y luego en el tubo seco o Eppendorf.
- Los tubos con anticoagulante pueden colocarse en heladera, mientras que el tubo seco dejarlo 1 o 2hs a temperatura ambiente para que se retraiga el coágulo y exude el suero, después si colocarlo en la heladera.
- En el caso de que se envíen muestras en ómnibus, refrigerar la muestra pero no en exceso ya que el frío directo puede hemolizarla .

2.c. Test Ràpidos por Inmunocromatografìa
La muestra a remitir para la mayoría de los Test es sangre sin anticoagulante, para lo cual usamos tubo seco.
En el caso especifico de Investigación de Parvovirosis se debe enviar materia fecal en un frasco con tapa de rosca, mientras que para Distemper Canino un hisopo con secreciones oculares o nasales.

SEROLOGIA

Para todo estudio Serológico extraer y remitir sangre entera (5 a 6 cc ) sin anticoagulante. Es muy importante que la sangre no esté hemolizada, para ello, se debe extraer suavemente y se debe sacar la aguja de la jeringa para descargar con cuidado y despacio la sangre por las paredes del tubo.
Dejar coagular la sangre a temperatura ambiente hasta que el coágulo se halla retraído, plazo que lleva aproximadamente 7 hora. Enviar las muestras refrigeradas e identificadas.

Brucelosis bovina y suina (Rosa de Bengala)
El laboratorio suministra los tubos, etiquetas y planilla para hacer el muestreo, si el cliente así lo requiere. En caso de resultado positivo la muestra es remitida al DILAVE para prueba complementaria.

Rinotraqueitis Infecciosa Bovina (IBR)
Se pueden remitir refrigerados:
• Enviar muestras pareadas de sangre (suero), con 3 semanas de intervalo si se desea hacer titulación de anticuerpos. Extraer un 10% de muestras del rodeo.
• Hisopos nasales o vaginales (con medio de transporte Stuart)
• Fluidos fetales

Diarrea Viral Bovina (DVB)
Se pueden remitir refrigerados:
• Remitir sangre entera para obtener suero.
• Sangre, en caso de Enfermedad de las mucosas para realizar hemograma (en tubo para hemograma).
• Hisopos nasales de terneros afectados para IF.

Leucosis
Remitir sangre entera para obtener suero.
El método utilizado para el análisis es la Inmunodifusión en Gel Agar y/o Elisa.

Leptospirosis
Extraer sangre entera para obtener suero. Acompañar envío con historia clínica y antecedentes de vacunación
Lo ideal es enviar muestras pareadas, distanciadas mínimo 15 días y máximo 21 días. La primer muestra debe ser tomada al comienzo de la enfermedad, para que sea posible ver claramente la seroconversión. Las muestras únicas también se aceptan, pero no se asegura su interpretación.

Neospora
Enviar sangre para obtener suero, Técnica empleada: Elisa.
A partir de fetos abortados: remitir contenido de cuajo, corazón, hígado y cerebro, refrigerados o congelados. Aunque el feto esté en estado de descomposición, al análisis se puede hacer igual. Técnica empleada.: IFI. También se puede efectuar histopatología.

EXTRACCIONES PARA BACTERIOLÓGICOS E HISTOPATOLÓGICOS

Para estudios bacteriológicos e histopatológicos, no se deben enviar órganos enteros ni animales.
De cada animal se deben tomar 2 muestras de los diferentes órganos, de zonas afectadas y normales, cortados en dados de 1 cm. por 1 cm.
Colocando uno en solución formolada al 10 % (90ml de solución fisiológica y 10ml de formol) y el otro trozo en un frasco sin líquido, ambos debidamente cerrados.
Enviar también líquidos abdominal, Torácico, sangre u orina, etc. En tubo o jeringa estéril.
Mandar improntas de los órganos remitidos como de los líquidos
Adjuntar datos de anamnesis y necropsia.
Colocar todo en caja de espuma plas con conservante de frío, no hielo.
Avisar al laboratorio por el envío.
Este trabajo debe ser realizado o supervisado por el veterinario responsable del caso o del establecimiento.

Bacteriología General
Tener en cuenta que todo análisis bacteriológico debe procesarse a la brevedad posible. Es requisito fundamental que el animal no haya recibido antibióticos locales o sistémicos
en los últimos 3 a 5 días para evitar toda interferencia en el crecimiento microbiano.
Cuando hace una solicitud de un cultivo bacteriológico y antibiograma debe mencionar que
tipo de muestra está enviando, Ej. : Exudado Otico, Ex Ocular, Liquido de Ascitis, Ex de Piel, Urocultivo, etc.
Si le interesa testear algún antibiótico en particular solicítelo en la orden de realización de exámenes.
En el caso de líquidos de punción (ascitis, articular, pleural, LCR), lavado bronco alveolar, biopsias quirúrgicas para cultivo bacteriológico, las muestras siempre deberán recolectarse en frasco o tubo estéril. Mantenerlas en heladera hasta su retiro o envío al laboratorio.

Exudados
Los hisopos con medio de transporte Stuart mantienen viable la muestra por aproximadamente
24 hs., mientras que los hisopos sin medio por unas 12 hs., evitar la desecación de la misma en éstos últimos colocando 0.5 cm de suero fisiológico estéril en el caso de que se vaya a demorar la remisión al laboratorio. No es necesario colocar los hisopos en heladera.

Exudado Otico
Antes de introducir un hisopo en el oído es conveniente limpiar el pabellón auricular con suero fisiológico a efectos de disminuir la carga bacteriana contaminante. Si sospecha de Malassezia y/o Otodectes cynotis puede enviar material para realizar observación directa con lactofenol en un Eppendorf o en un hisopo.

Exudado Ocular
La muestra se obtiene con hisopo a partir de la conjuntiva ocular.

Urocultivo
La muestra ideal es la punción vesical. Como segunda opción el cateterismo vesicalo la micción espontánea donde la muestra debe obtenerse de la mitad de la micción, aunque en éstas últimas opciones hay más posibilidades de contaminación secundaria. Es suficiente con 1 o 2 ml de orina. Mantener la muestra refrigerada en heladera a 4°C hasta su envío al laboratorio.

Lesiones de Piel Cerradas (Pústulas, Vesículas, Costras, etc.)
Desinfectar la lesión con alcohol 70 .Dejar actuar 2 minutos, remover costras con aguja estéril, realizar la toma con un hisopo de la zona profunda de la lesión. Si la lesión presenta vesículas o colección de pus, puncionar con aguja y jeringa de insulina. Enviar el líquido en jeringa al laboratorio.

Lesiones de Piel Abiertas (Ulceras, Heridas, Herida operatoria, etc.)
Limpiar la lesión con suero fisiológico, si existe colección serosanguinolenta, pus, etc., obtener la muestra en jeringa. Si no fuera posible obtener secreción con jeringa realizar la toma con hisopo.

Secreción respiratoria, Lavado broncoalveolar
Enviar una jeringa estéril con contenido y un hisopo

Piel. Dermatofitos
Se puede remitir pelos y escamas dérmicas obtenidas por raspaje con bisturí estéril de la zona afectada y del límite con la zona sana. Además tomar pelos con una pinza estéril o desinfectada y colocar todo entre 2 portaobjetos nuevos unidos en sus extremos por un leuco o cinta adhesiva.
Es importante que el animal no haya recibido en por lo menos 7 días ningún tratamiento local o sistémico con antimicóticos o antisépticos.

EXTRACCIONES DE MATERIA FECAL PARA COPROPARASITARIOS

Coproparasitarios en Pequeños Animales

Coproparasitarios
La muestra deberá ser recién emitida, en el caso de solicitar investigación de Protozoarios (Giardias y Coccidios) se solicitarán muestras recolectadas durante tres días seguidos.
La misma puede ir en un mismo recipiente o separados y siempre debe mantenerse refrigerada a 4°C en heladera hasta su envío al laboratorio.

Sangre Oculta en Materia Fecal
El paciente deberá recibir una dieta exenta de carne durante tres días debido a que la
hemoglobina puede dar falsos positivos. Mantener en heladera hasta su envío al laboratorio.

Coprofuncional
El paciente debe realizar una dieta durante 3 días, la cual debe contener los siguientes elementos
Dieta para un canino de 30 Kg. 350g de carne picada
400 g de arroz bien hervido
200g de puré
4 – 5 cucharadas de aceite

Al cuarto día juntar la materia fecal y colocarla en un frasco limpio y seco. Guardar la muestra en la heladera hasta su envío al laboratorio.
Dicho estudio nos da información de los procesos digestivos, almidones, proteínas, grasas, y cuerpos extraños.

Coproparasitarios en Ganado

Gastrointestinales ,Fasciola hepática (Saguaypé) y Coccidias :
Las muestras para examen parasitológico deben ser colectadas del recto de los animales, a menos que el animal sea observado en el momento en el que está defecando, única situación en la cual se puede aceptar la colecta del piso y de la zona superior.
Las muestras deben ser lo mas representativa posible, en ovinos se podría decir un 10% en majadas de hasta 1000 animales, superior a ese numero 5%. En vacunos podríamos decir de un 10% de cada lote. Si la población a muestrear es muy grande se puede tomar iguales porcentajes de animales en mejor estado y en mal estado. Las muestras deben venir en bolsitas de nylon o en envases herméticos para evitar la eclosión de huevos.
Las muestras deben ser enviadas con refrigeración ,(aunque en invierno se pueden enviar sin refrigeración ) y deben ser mantenidas a 4ºC hasta ser procesadas, no mas de 9 días desde su extracción.
Método de análisis: Mac Master modificado y sedimentación.

Extracción para Histopatología

Histopatología
Remitir muestras de tejido de 1 cm de ancho como máximo. Si es intestino, basta con 2 cm de largo. La muestra debe ser representativa de la estructura del órgano y debe incluir la unión de tejido afectado y sano. La muestra debe ser colocada en un frasco con boca ancha e inmersa lo antes posible en 10 veces su volumen en fijador (formol al 10 % ). Luego de 48 hs de fijación, puede ser enviado al laboratorio en un volumen reducido de formol. No congelar. Tapar con cinta la tapa del frasco y envolverlo con papel para que absorba posibles derrames o rupturas accidentales del frasco. Enviar historia clínica y demás datos en un a bolsa de nylon aparte.

Biopsia de piel
La biopsia de piel es la principal herramienta de diagnóstico que dispone el clínico de pequeños animales en dermatología. La gran mayoría de las enfermedades de la piel se encuentran actualmente definidas en base al tipo y patrón de las lesiones al microscopio óptico. La biopsia puede revelar cáncer de piel o lesiones benignas no cancerosas así como enfermedades inflamatorias y algunas enfermedades metabólicas de la piel. Asimismo, se pueden identificar parásitos, bacterias, y hongos.

I) INDICACIONES DE LA BIOPSIA DE PIEL (¿Cuándo realizar una biopsia?)
1. Todas las lesiones obviamente neoplásicas o sospechosas de neoplasia.
2. Todas las enfermedades ampollosas (Ej. pénfigos).
3. Cualquier ulceración persistente.
4. Cualquier dermatosis que no responda al tratamiento en un plazo razonable (generalmente 3 semanas).
5. Cualquier dermatosis que en opinión del clínico sea inusual o aparezca grave.
6. Toda dermatosis cuya terapia sea larga o muy costosa.

II) SELECCIÓN DE LA MUESTRA (¿Qué se debe muestrear?)
1. Obtener preferentemente las lesiones primarias y evitar las secundarias.
2. Seleccionar las lesiones más representativas de la enfermedad.
3. Preferir las lesiones más nuevas o recientes.
4. Obtener múltiples biopsias del mismo proceso seleccionando lesiones en diferente fase de desarrollo.
5. En general, se debe incluir únicamente piel enferma, excepto las ulceraciones que deben incluir tejido adyacente y las lesiones muy sutiles como eritema o alopecia que deben acompañarse de muestras separadas (identificadas) de piel normal.

III) MÉTODO DE BIOPSIA (¿Cómo se extrae la muestra?)
1. El procedimiento es fácil y rápidamente realizable en consultorio con buena sujeción y/o anestesia local.
2. Depilar parcialmente con tijera el sitio seleccionado, cuidando de no remover restos patológicos superficiales o de provocar lesiones iatrogénicas.
3. Nunca frotar la zona de biopsia ni usar yodoformo u otro antiséptico.
4. Se inyecta subcutáneamente 1-2 ml de lidocaína al 2% directamente debajo de la zona seleccionada, usando una aguja fina.
5. A continuación se utiliza un bisturí para cortar a través del espesor completo de la piel un fragmento de piel elíptico o rectangular pequeño (0.5-1cm x 1-2cm), nunca mayor de 2 x 2 cm de lado.
6. Retirar el fragmento usando una pinza mosquito, con cuidado para evitar artefactos.
7. Las vesículas y bullas deben extraerse enteras tratando en lo posible de no romperlas.
8. En general no es necesario dar ningún punto.
9. La muestra se coloca inmediatamente en formol al 10% (1 parte de formol y 9 partes de agua) en cantidad suficiente para cubrir holgadamente.
10. Debe usarse recipiente hermético adecuado al tamaño de la muestra.
11. Identificar indeleblemente la muestra y enviar al laboratorio para su procesamiento.
12. En neoplasias se extirpa totalmente el tumor (biopsia excisional).
13. Si el tumor es muy grande debe cortarse seriadamente en láminas de no más de 1 cm de espesor y enviar la/s que se consideren más representativas.
14. NO PONER UN TUMOR MUY GRANDE APRETADO EN UN FRASCO YA QUE EL FORMOL NO PENETRA.